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Western及IP细胞裂解液图片
产品货号:
GL1467
中文名称:
Western及IP细胞裂解液
英文名称:
Cell lysis buffer for Western and IP
产品规格:
100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

Western及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞,并获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳,Western,免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100,低浓度sodium pyrophosphate等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。


用Western及IP细胞裂解液得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度,由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。




组分规格保存
Western及IP细胞裂解液100mL4℃
PMSF(100mM)1.5mL-20℃

保存:-20℃,有效期1年。


  • 去除贴壁细胞的培养液时,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
  • 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
  • 如果细胞量较多,必需分装成50~100万细胞/离心管,然后再裂解,大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
  • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分,然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
  • Cell lysis buffer for Western and IP低温存放可能产生絮状沉淀,可用水浴溶解,但应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
  • 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。
  • 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。



配制含有PMSF的细胞裂解液:取Western及IP细胞裂解液置于室温平衡,加入PMSF,使其终浓度为1mM,临用前配制,不可长期保存。
  • 贴壁培养细胞
    • 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
    • 按照6孔板每孔加入100~200μL含有PMSF的裂解液的比例,加入Western及IP细胞裂解液;移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触,通常裂解液作用于细胞1~5s内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150~200μL,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
    • 10000~12000g,离心5~10min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳),取上清。
    • 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
  • 悬浮培养细胞
    • 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。用手指轻弹细胞,使其松散。
    • 下同贴壁细胞2~4操作步骤。
  • 组织样本
    • 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
    • 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
    • 按照每20mg组织加入150~250μL裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液,冰上或4℃裂解30~60min。亦可以采用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制在2~5min之内,以减少蛋白的降解。
    • 下同贴壁细胞3~4操作步骤。

相关搜索:Western及IP细胞裂解液Western细胞裂解液IP细胞裂解液免疫沉淀裂解液免疫共沉淀裂解液Cell lysis buffer for Western and IP
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